寧波正揚生物病毒檢測注意事項

根據現有法規和指導原則可以發(fā)現，RCL病毒檢測方法主要包含指示細胞培養法、ELISA法、PCR/q-PCR法和PERT法。因為指示細胞培養法檢測需28天，并且因為陽(yáng)性對照病毒的性質(zhì)，要求其需要在P3或者P2實(shí)驗室環(huán)境中進(jìn)行，致使該方法具有耗時(shí)長(cháng)，環(huán)境要求高的特點(diǎn)。相比而言,基于VSV-G序列的q-PCR方法或基于psi-gag序列的PCR方法，因其具有檢測時(shí)間短、環(huán)境條件簡(jiǎn)單、靈敏度高和可重復性強等優(yōu)點(diǎn)，被許多CAR-T申報企業(yè)作為快速放行方法。歡迎聯(lián)系重組腺相關(guān)病毒檢測。寧波正揚生物病毒檢測注意事項

基因治 療產(chǎn)品是近年來(lái)國內外藥物研發(fā)的熱點(diǎn)，通常由各種病毒或非病毒載體攜帶治 療基因組成。在病毒載體中，慢病毒載體(LVs)由于其有效的將基因整合進(jìn)靶細胞基因組、穩定的基因表達等特點(diǎn)，被認為是蕞有希望的基因治 療載體?？紤]到慢病毒對人的病原性及相關(guān)的安全性，所使用的慢病毒載體均為復制缺陷型載體，但在病毒載體生產(chǎn)過(guò)程中可能由于同源重組或非同源重組導致可復制性慢病毒(RCL)的產(chǎn)生，RCL可以整合到細胞基因組中，從而導致原ai基因激 活，抑ai基因破壞等，因此，這類(lèi)產(chǎn)品中的復制型慢病毒檢測是安全性檢測中非常重要的項目，美國FDA及中國CDE都要求在生產(chǎn)的整個(gè)過(guò)程及不同階段都要進(jìn)行RCL檢測，以確保無(wú)RCL的污染。上海重組腺相關(guān)病毒檢測常見(jiàn)問(wèn)題復制型逆轉錄病毒檢測要求有哪些？

美國FDA要求對于采用γ-逆轉錄病毒載體和慢病毒載體的產(chǎn)品，需要在整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程及不同階段進(jìn)行RCR復制型逆轉錄病毒／RCL復制型慢病毒檢測，針對載體生產(chǎn)用主細胞庫、工作細胞庫、生產(chǎn)終末細胞、載體上清液及在體外培養超過(guò)4天的載體轉到細胞進(jìn)行檢測。針對慢病毒載體使用時(shí)RCL的檢測，除了金標準——指示細胞培養法，還需要選擇2種不同原理的快檢方法對其進(jìn)行補充檢測。RT-PCR法具備操作便捷快速、特異性好、靈敏度高、穩定性好等優(yōu)點(diǎn)，是RCR/RCL補充檢測的優(yōu) 選方法。

目前針對RCL復制型慢病毒檢測的方法差異很大，例如，實(shí)時(shí)定量PCR方法(Q-PCR法)會(huì )因為細胞或質(zhì)粒DNA殘留導致假陽(yáng)性；合胞體形成測定法需要慢病毒具有完整的能力并且包含Env元件，該方法的靈敏度還未得到驗證；標志物補救測定法尚不清楚來(lái)自載體生產(chǎn)過(guò)程中的RCL是否會(huì )濟活標志物；逆轉錄酶活性測定法(PERT)不能區分RCL和載體顆粒，且細胞中固有的內源性 病毒顆粒也會(huì )影響檢測結果的判斷；細胞培養法檢測時(shí)間過(guò)長(cháng)。如您有需要，歡迎聯(lián)系！為什么要做復制型逆轉錄病毒檢測？

RCL復制型慢病毒檢測方法包括以下3種：①ELISA法(p24蛋白測定)：適用于由載體生產(chǎn)過(guò)程中病毒基因組之間的重組形成RCL的檢測。但，對于VSV-G包膜質(zhì)粒和來(lái)源于其他病毒的gal-pol基因功能組件之間發(fā)生重組不表達p24蛋白的假型病毒不適用。其優(yōu)點(diǎn)為適用性廣（濃縮載體、終末細胞、血清血漿等多種樣本）、靈敏度高和可定量等。②使用qPCR的方法測定VSV-G基因和PCR方法檢測由病毒載體質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒重組產(chǎn)生的psi-gag基因序列，具有靈敏度高，可重復性和操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。③測定逆轉錄酶活性的方法，它可以用來(lái)檢測RCL相關(guān)的不同結構的逆轉病毒，缺點(diǎn)為在某些細胞檢測中，存在背景高的現象。慢病毒檢測助力CAR-T細胞醫治產(chǎn)品質(zhì)控放行。杭州RCR病毒檢測價(jià)格

CAR-T細胞醫治產(chǎn)品中復制型慢病毒檢測的監管要求。寧波正揚生物病毒檢測注意事項

qPCR法RCL/RCR病毒檢測：目前許多CAR-T企業(yè)采用Q-PCR方法直接測定CAR-T終產(chǎn)品中的VSV-G序列或psi-gag序列，因考慮到CAR-T細胞種產(chǎn)品一般需要新鮮輸注的特殊情況，基于細胞培養法的RCL/RCR檢測方法周期較長(cháng)，建議在細胞產(chǎn)品制備過(guò)程中進(jìn)行多面控制(如對慢病毒載體及生產(chǎn)終末細胞采用基于細胞培養方法測定RCL/RCR，以確保生產(chǎn)工藝過(guò)程中不存在RCL的風(fēng)險)，細胞終產(chǎn)品階段可采用qPCR檢測法快速放行。qPCR法RCL/RCR病毒檢測：目前許多CAR-T企業(yè)采用Q-PCR方法直接測定CAR-T終產(chǎn)品中的VSV-G序列或psi-gag序列，因考慮到CAR-T細胞種產(chǎn)品一般需要新鮮輸注的特殊情況，基于細胞培養法的RCL/RCR檢測方法周期較長(cháng)，建議在細胞產(chǎn)品制備過(guò)程中進(jìn)行多面控制(如對慢病毒載體及生產(chǎn)終末細胞采用基于細胞培養方法測定RCL/RCR，以確保生產(chǎn)工藝過(guò)程中不存在RCL的風(fēng)險)，細胞終產(chǎn)品階段可采用qPCR檢測法快速放行。。寧波正揚生物病毒檢測注意事項

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